Myc Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421770

Panoramica

Myc codifica il fattore di trascrizione MYC, un regolatore centrale della crescita cellulare, dell’accumulo di biomassa e della progressione del ciclo cellulare nelle cellule di topo. MYC si lega agli elementi E-box per controllare ampi programmi di espressione genica che coordinano la biogenesi dei ribosomi, il metabolismo di nucleotidi e amminoacidi e la funzione mitocondriale, integrando al contempo segnali provenienti da vie come MAPK/ERK, PI3K–AKT–mTOR e WNT/β-catenina. Un controllo rigoroso di Myc è necessario per il normale sviluppo e l’omeostasi tissutale, e la sua disregolazione è fortemente associata alla trasformazione oncogena e a stati di differenziamento alterati. Poiché MYC influenza l’apoptosi, le risposte allo stress da replicazione del DNA e l’accessibilità della cromatina, è ampiamente studiato nella biologia del cancro, nei programmi delle cellule staminali e nel rimodellamento metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myc (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myc.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myc per lo studio della segnalazione di Myc, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myc critici per la funzione di Myc
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myc CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Myc CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myc Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Myc (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.