Myc CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421770-ACT

Myc（c-Myc）は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス／ロイシンジッパー（bHLH-LZ）型の転写因子であり、マウス細胞において細胞増殖、バイオマス蓄積、細胞周期進行、代謝、リボソーム生合成を制御する広範な遺伝子発現プログラムを統括する。Wnt/βカテニン、受容体型チロシンキナーゼ、MAPK/PI3K などのマイトジェン性シグナル伝達経路の下流で機能し、MAX をはじめとする共因子との相互作用を介して、クロマチン状態や転写伸長を制御する。Myc 活性は DNA 複製ストレス応答、アポトーシス、分化の意思決定にも影響し、多様ながんモデルにおける腫瘍化や腫瘍維持と結び付けられている。Myc 発現の異常は、増殖と系譜決定が厳密に調節される発生表現型や組織再生の文脈においても重要である。

Myc CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mycの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myc CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Myc 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMyc転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mycの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMyc遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyc依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMyc発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyc経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。