Myc CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400001-ACT

MYCはMyc転写因子をコードしており、Mycは細胞増殖・代謝・増殖能の中枢的な制御因子である。E-box配列に結合し、クロマチン関連コファクターのリクルートを協調させることで、RNAポリメラーゼII依存的転写を調節する。MycはRTK/RAS/MAPKやPI3K/AKT/mTORなどのマイトジェン経路からのシグナルを統合し、リボソーム生合成、ヌクレオチド合成、ミトコンドリア機能、細胞周期進行を制御するプログラムを形成する。MYC発現の厳密な制御は分化と組織恒常性の維持に不可欠である一方、その破綻はゲノム不安定性、代謝状態の変化、腫瘍性の転写リプログラミングとしばしば関連する。したがってMYCは、腫瘍生物学、ストレス応答、文脈依存的な転写制御における役割の観点から広く研究されている。

Myc CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myc CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mycの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyc依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyc経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。