Mx1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421763

Panoramica

Mx1 (myxovirus resistance 1) codifica una GTPasi simile alla dinamina, stimolata dall’interferone, che agisce come un effettore chiave della risposta antivirale innata nelle cellule murine. In seguito alla segnalazione degli interferoni di tipo I e di tipo III attraverso la via JAK–STAT, Mx1 viene indotto a livello trascrizionale e può limitare la replicazione di un’ampia gamma di virus a RNA interferendo con il traffico dei nucleocapsidi virali e con la formazione dei complessi di replicazione. L’attività di Mx1 si intreccia con reti più ampie di geni stimolati dall’interferone (ISG) che modulano la segnalazione infiammatoria, la presentazione dell’antigene e l’immunità cellulo-intrinseca. Le variazioni nella restrizione mediata da Mx1 sono state sfruttate per studiare la suscettibilità dell’ospite alle infezioni virali, l’immunopatologia guidata dall’interferone e i meccanismi di evasione immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mx1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mx1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mx1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mx1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mx1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mx1 per lo studio della segnalazione di Mx1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mx1 critici per la funzione di Mx1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mx1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mx1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mx1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mx1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mx1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mx1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mx1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.