MUS81 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402664-ACT

ヒトMUS81は構造特異的エンドヌクレアーゼをコードしており、EME1/EME2と複合体を形成して、停止した複製フォークや組換え中間体（ニックを有するホリデイジャンクション、Dループ、3′フラップなど）を解消します。MUS81はDNA損傷応答ネットワークで機能し、相同組換え、ファンコニ貧血関連修復、複製ストレス耐性経路と協調してゲノム安定性を維持します。異常なDNA構造のプロセシングを制御することで、MUS81はS期および有糸分裂期におけるチェックポイントシグナル伝達や染色体分配の正確性にも影響を与えます。MUS81活性や経路バランスの破綻は、複製ストレスへの対処の変化やゲノム不安定性といった表現型と関連しており、がん生物学や遺伝性DNA修復欠損の観点から重要とされています。

MUS81 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MUS81の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MUS81 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MUS81 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMUS81転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MUS81の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMUS81遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMUS81依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMUS81発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMUS81経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。