Mucin 4/MUC4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400329-NIC

MUC4はムチン4をコードしており、ムチン4は高分子量の膜結合型糖タンパク質です。広範なO-結合型糖鎖修飾（O-グリコシル化）を介して、上皮バリア機能、潤滑、ならびにグリコカリックスの形成に寄与します。細胞表面ムチンとしてのMUC4は、細胞―細胞および細胞―マトリックス間相互作用に関与し、ERBBファミリー関連経路を含む受容体シグナル伝達ネットワークを調節し得ることで、増殖、分化、ストレス応答に影響を及ぼします。MUC4の発現変化や糖鎖型（グライコフォーム）のリモデリングは、上皮の形質転換、浸潤に関連する表現型、ならびに粘膜界面における免疫回避機構との関連でしばしば研究されています。これらの特性により、MUC4はムチン生物学、上皮恒常性、そして疾患関連モデルにおけるシグナル伝達のクロストークを解明するうえで、有用なマーカーであり機能的ハブとなります。

Mucin 4/MUC4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MUC4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MUC4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MUC4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MUC4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。