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Mucin 4/MUC4CRISPR激活质粒(h) | sc-400329-ACT | 20 µg | $397.00 |
MUC4 编码黏蛋白4(mucin 4),这是一种高分子量的跨膜糖蛋白,其富含 O-糖基化的细胞外结构域有助于上皮屏障功能、润滑作用,并参与细胞表面信号传导。黏蛋白4参与细胞—细胞及细胞—基质相互作用,并可调节受体酪氨酸激酶信号传导,包括与 ERBB2/HER2 相关、影响增殖、分化与存活的通路。在多种来源于上皮的疾病中,MUC4 的表达改变及其糖基化形式(glycoform)谱的变化与黏附失调、上皮重塑以及炎症性微环境相关。由于 MUC4 会影响细胞表面结构与信号输出,它被广泛用于黏膜生物学、上皮极性以及肿瘤相关表型的模型研究。
Mucin 4/MUC4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MUC4的表达。
Mucin 4/MUC4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MUC4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MUC4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Mucin 4/MUC4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MUC4位点,并能够研究内源性位点上依赖于Mucin 4/MUC4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MUC4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Mucin 4/MUC4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。