Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 12/MUC12: sc-400505-ACT

MUC12 code la mucine 12, une mucine ancrée à la membrane et fortement O‑glycosylée, qui contribue au glycocalyx épithélial et soutient la fonction barrière des surfaces muqueuses. En modelant le microenvironnement péricellulaire, MUC12 peut influencer les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, l’organisation de la membrane apicale et les réponses aux stimuli inflammatoires dans l’épithélium gastro-intestinal et d’autres épithéliums. Des altérations de l’expression et de la glycosylation des mucines sont fréquemment associées au remodelage épithélial, à une différenciation dérégulée, ainsi qu’à des modifications des programmes d’adhésion et de signalisation. En conséquence, MUC12 est étudiée comme un marqueur et un modulateur dépendant du contexte dans l’inflammation des muqueuses et les cancers épithéliaux, notamment au travers de travaux examinant comment la biologie des mucines influence les interactions entre la tumeur et son microenvironnement.

Mucin 12/MUC12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 12/MUC12 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 12/MUC12. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 12/MUC12 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 12/MUC12 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.