MTDH Plasmide Double Nickase (h): sc-413927-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MTDH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MTDH Double Nickase Plasmid (h) e il MTDH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MTDH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MTDH Antibody (2F11C3D4): sc-517220
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MTDH Plasmide Double Nickase (h) | sc-413927-NIC | 20 µg | $410.00 |
MTDH (metadherin/AEG-1) codifica una proteina scaffold multifunzionale che coordina programmi trascrizionali e post-trascrizionali legati alle risposte allo stress cellulare, alla sopravvivenza e alla segnalazione infiammatoria. È stato implicato nell’attivazione di vie quali NF-κB e PI3K–AKT, nella modulazione della segnalazione MAPK e nella regolazione della traduzione dell’mRNA e di complessi di legame all’RNA che contribuiscono alla proteostasi. MTDH interagisce inoltre con processi di adesione cellulare e di traffico vescicolare, influenzando la dinamica del citoscheletro e la plasticità cellulare. Un’espressione deregolata di MTDH è spesso associata a reti di segnalazione oncogeniche e a fenotipi rilevanti per la progressione tumorale, la metastatizzazione e la risposta ai trattamenti, rendendolo un bersaglio comune per studi meccanicistici in biologia del cancro.
MTDH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MTDH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MTDH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MTDH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MTDH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.