MTAP Double Nickaseプラスミド (h): sc-406223-NIC

MTAP（メチルチオアデノシンホスホリラーゼ）はメチオニンサルベージ経路における重要酵素であり、ポリアミン生合成の過程で生成される5′-メチルチオアデノシンのリン酸分解（ホスホロリシス）を触媒します。メチオニンとアデニンを再利用することで、MTAPはヌクレオチド恒常性、メチル化能、ならびに細胞の代謝バランスの維持に寄与し、プリン代謝を一炭素代謝およびポリアミン関連プロセスと結び付けています。MTAPの欠失や発現低下はCDKN2A/Bに隣接するゲノム領域でしばしば観察され、腫瘍に関連する代謝依存性や変化したメチル化ネットワークへの影響という観点から広く研究されています。そのため、MTAPの機能攪乱は、ヒト細胞における代謝リプログラミング、エピジェネティック制御、ならびにストレス適応シグナル伝達の研究において重要な要素となります。

MTAP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MTAP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MTAP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MTAPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MTAPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。