MTAP CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-426257-ACT-2

マウスのMtapは、メチオニン回収（サルベージ）経路の中核酵素であるメチルチオアデノシンホスホリラーゼ（MTAP）をコードし、5′-メチルチオアデノシンのリン酸分解を触媒することでアデニンおよびメチオニンのリサイクルを支え、細胞内のプリン代謝を維持する。MTAP活性は、ポリアミン生合成で生じる副産物の代謝回転をワンカーボン代謝と結び付け、メチル化能に影響を与えることで、ヌクレオチドプール、酸化還元バランス、ならびに増殖恒常性を左右する。MTAP機能の喪失または低下は、がんに関連する状況において代謝依存性の変化やゲノム不安定性としばしば関連し、Cdkn2a座位の異常と近接して認められることも多い。Mtapを標的としたマウス遺伝子編集ツールは、代謝リワイヤリング、エピジェネティック制御、細胞状態遷移の機構解明を可能にし、発生および疾患生物学における経路間クロストークを解析するためのin vivo／in vitroモデルの構築を支援する。

MTAP CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mtapの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MTAP CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Mtap 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMtap転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MTAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMtap遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMTAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMtap発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMTAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。