Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MTA3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402739-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MTA3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MTA3ダブルニカースプラスミド（h）およびMTA3ダブルニカースプラスミド（h2）は、MTA3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MTA3 抗体 (428C2a): sc-81325
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MTA3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402739-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MTA3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402739-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトMTA3（metastasis associated 1 family member 3）はクロマチン関連の制御因子であり、NuRD（ヌクレオソーム再編成・脱アセチル化）複合体の構成要素として機能する。ATP依存的なクロマチン再編成とヒストン脱アセチル化を協調させることで、転写プログラムを調節する。MTA3はエンハンサーやプロモーターのアクセシビリティを形成し、特に上皮系の文脈において、細胞同一性の維持、増殖、系譜特異的分化などの過程に影響を与える。MTA3依存的な抑制／活性化ネットワークの破綻は、上皮―間葉転換（EMT）シグナルの変化や、複数の疾患関連モデルで観察される遺伝子発現シグネチャーの変動と関連づけられている。核内のエピジェネティック因子として、MTA3はクロマチン再編成を、ホルモン応答性転写、細胞周期制御、ストレス応答プログラムといった経路出力に結びつけて理解する目的で、しばしば研究対象となる。
MTA3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MTA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MTA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MTA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MTA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。