MTA3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402739-ACT

ヒトMTA3（metastasis-associated protein 3：転移関連タンパク質3）は、NuRD（nucleosome remodeling and histone deacetylase）クロマチンリモデリング／ヒストン脱アセチル化複合体の中核構成要素であり、発生や系譜決定に関わる遺伝子プログラム全体にわたってヌクレオソーム配置と転写抑制を協調的に制御します。HDACや他のNuRDサブユニットと協働することで、MTA3はエピジェネティック制御を介して、上皮分化、ホルモン応答性転写、ならびに細胞周期に連動した転写状態を調節します。MTA3の発現異常やNuRD活性の変化は、異常分化、上皮間葉転換（EMT）関連の遺伝子発現パターン、そして多様な組織コンテキストにおける腫瘍生物学と関連づけられてきました。クロマチン調節因子としてのMTA3は、転写の可塑性、クロマチンアクセシビリティ、遺伝子発現のネットワークレベルでの制御における役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

MTA3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MTA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MTA3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MTA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMTA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MTA3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMTA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMTA3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMTA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMTA3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。