MS4A6A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417401-ACT

MS4A6A codifica um membro da família membrane-spanning 4A (MS4A), um grupo de proteínas do tipo tetraspanina enriquecidas em linhagens hematopoéticas e mieloides. O MS4A6A é frequentemente utilizado como marcador de estados de ativação de micróglia e macrófagos e está implicado na organização de membrana e na regulação de complexos de sinalização na superfície celular que moldam as respostas imunes inatas. A expressão de MS4A6A acompanha programas inflamatórios e vias ligadas à ativação de células imunes, à função fagocítica e a estados transcricionais induzidos por citocinas. Alterações na expressão de MS4A6A têm sido associadas a fenótipos relacionados à neuroinflamação e são comumente estudadas no contexto da genética de doenças neurodegenerativas e da biologia da micróglia.

MS4A6A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MS4A6A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MS4A6A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MS4A6A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MS4A6A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MS4A6A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MS4A6A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MS4A6A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MS4A6A em células tumorais com expressão de MS4A6A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.