MRP-S18B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412012-ACT

MRPS18Bはヒトのミトコンドリアリボソームタンパク質MRP-S18Bをコードしており、ミトコンドリアでコードされた酸化的リン酸化関連タンパク質の翻訳を支える28S小サブユニットの構成要素です。ミトコンドリアタンパク質合成に寄与することで、MRP-S18Bは電子伝達系の完全性、ATP産生、ならびにミトコンドリア全体の恒常性維持に役立ちます。ミトリボソーム機能の破綻は細胞のエネルギー代謝を再編し、酸化ストレスを増大させ得るため、MRPS18Bに関連する生物学はミトコンドリア品質管理、プロテオスタシス、ストレスシグナル伝達を制御する経路と結び付きます。ミトコンドリア翻訳能の変化は、神経変性、心代謝機能障害、がんに伴う代謝リプログラミングの文脈でしばしば観察されることから、MRPS18Bは機構研究に有用なノードとなります。

MRP-S18B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MRPS18Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP-S18B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MRPS18B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMRPS18B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP-S18Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMRPS18B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP-S18B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMRPS18B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP-S18B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。