MRP-S18A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412466-ACT

MRPS18Aは、哺乳類ミトコンドリアリボソームの28S小サブユニットを構成する核コード型タンパク質であるミトコンドリアリボソームタンパク質S18A（MRP-S18A）をコードします。MRP-S18Aは、mtDNAにコードされた酸化的リン酸化（OXPHOS）サブユニットのミトコンドリア内翻訳を支え、呼吸鎖機能、ATP産生、ならびにミトコンドリアのプロテオスタシスに影響を与えます。ミトリボソームタンパク質の破綻は、ミトコンドリア遺伝子発現の低下を引き起こし、統合ストレス応答を誘導するとともに、アポトーシスや活性酸素種（ROS）恒常性と交差する代謝シグナル伝達を変化させ得ます。そのためMRPS18Aは、神経変性やがんに伴う代謝適応など、多様なヒト疾患で観察されるミトコンドリア機能障害やバイオエネルギーの再編成に関する研究において重要な遺伝子です。

MRP-S18A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MRPS18Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP-S18A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MRPS18A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMRPS18A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP-S18Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMRPS18A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP-S18A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMRPS18A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP-S18A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。