Mrf-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-406689-ACT-2

O ARID5A (Mrf-1) humano codifica um regulador de ligação a RNA contendo um domínio de interação com regiões ricas em AT, que modula a expressão de genes inflamatórios ao estabilizar seletivamente mRNAs de citocinas, incluindo IL6, moldando assim as respostas imunes inata e adaptativa. O ARID5A integra sinais a jusante das vias TLR/IL-1R e NF-κB e contrabalança programas de degradação mediados por RNases para controlar a magnitude e a duração da ativação imune. A atividade desregulada do ARID5A tem sido associada à produção aberrante de citocinas e a patologias mediadas pelo sistema imune em contextos como autoimunidade, inflamação crônica e inflamação associada a tumores. A edição gênica de ARID5A apoia estudos mecanísticos do controle pós-transcricional, da diferenciação e ativação de células imunes e do mapeamento de vias de redes de citocinas em modelos celulares humanos.

Mrf-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARID5A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mrf-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARID5A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARID5A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mrf-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARID5A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mrf-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mrf-1 em células tumorais com expressão de ARID5A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.