MRE11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401510-ACT

MRE11は保存性の高いヌクレアーゼをコードしており、DNA二本鎖切断修復の中核的なセンサー／エフェクターであるMRE11–RAD50–NBN（MRN）複合体を形成します。DNA末端処理、ATM/ATRチェックポイントシグナル伝達、相同組換え、テロメア維持に関与することで、MRE11は複製ストレスや遺伝毒性ストレス下におけるゲノム安定性の維持に寄与します。MRN機能の変化はDNA損傷応答の不全、染色体不安定性、がん関連表現型と関連しており、MRE11活性は複製フォーク動態やクロマチン関連修復を扱う研究でしばしば解析対象となります。そのためMRE11は、DDR経路間のクロストークやDNA損傷性の攪乱に対する細胞感受性の機構を解明するうえで重要な結節点となります。

MRE11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MRE11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRE11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MRE11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMRE11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRE11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMRE11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRE11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMRE11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRE11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。