MPZL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407478-ACT

MPZL1（myelin protein zero-like 1；髄鞘タンパク質ゼロ様1。PZRとしても知られる）は、SHP2（PTPN11）を中心とするチロシンホスファターゼシグナル伝達の足場として機能する、膜貫通型の免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質をコードします。細胞質側のITIMモチーフを介して、MPZL1は細胞接着、伸展、遊走、細胞骨格リモデリングを制御するリン酸化依存性経路を調節し、受容体型チロシンキナーゼや細胞外マトリックス相互作用からのシグナルを統合します。MPZL1に関連するシグナルは、フォーカルアドヒージョンの動態制御やMAPK/ERK経路活性の調節と関連づけられており、多様な細胞状況において増殖性および運動性の表現型に影響を与えます。MPZL1の発現やシグナル伝達の異常は、浸潤や転移に関連する挙動など、腫瘍学的に重要なプロセスで報告されており、シグナルネットワークや接着駆動性表現型の機構解析研究における有用性を支持しています。

MPZL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MPZL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MPZL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MPZL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMPZL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MPZL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMPZL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMPZL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMPZL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMPZL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。