mPRβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403374-ACT

PAQR8は、PAQRファミリーに属する7回膜貫通型のプロゲスチン受容体である膜型プロゲステロン受容体β（mPRβ）をコードしており、細胞膜上で迅速な（非ゲノム性の）プロゲステロンシグナル伝達を媒介する。mPRβは、Gi/o共役によるcAMPの調節や下流のキナーゼシグナル伝達など、セカンドメッセンジャー経路の制御に関与するとされ、細胞周期制御、分化、ストレス応答性の転写プログラムに影響を及ぼす。ヒト組織においては、プロゲステロン依存性シグナルがステロイドホルモンネットワークや膜受容体間のクロストークと交差する生殖・内分泌の文脈で、PAQR8の発現が研究されてきた。プロゲステロンシグナルの破綻やPAQRファミリー受容体の発現変化は、生殖関連疾患モデルやがんに伴う経路リモデリングを含むホルモン応答性生物学でしばしば評価されており、PAQR8はステロイドシグナル伝達ダイナミクスの機序解明研究における標的として位置づけられている。

mPRβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAQR8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mPRβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAQR8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAQR8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mPRβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAQR8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmPRβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAQR8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmPRβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。