Plásmido Doble Nickase (h) MPO/Myeloperoxidase: sc-400822-NIC

MPO codifica la mieloperoxidasa, una peroxidasa que contiene hemo, almacenada en los gránulos azurófilos de los neutrófilos y liberada durante la degranulación y la formación de trampas extracelulares de neutrófilos (NET). La MPO cataliza la conversión de peróxido de hidrógeno y cloruro en ácido hipocloroso y otros oxidantes reactivos relacionados, conectando el estallido respiratorio dependiente de la NADPH oxidasa con la química efectora antimicrobiana y la señalización redox. Mediante la oxidación de lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, la actividad de la MPO influye en las cascadas de señalización inflamatoria, la disfunción endotelial y el reclutamiento de células inmunitarias. La alteración de la expresión o la actividad de la MPO se ha asociado con una inmunidad innata desregulada y con fenotipos de estrés oxidativo relevantes para la biología de las enfermedades inflamatorias y vasculares, así como en estudios del microambiente tumoral.

MPO/Myeloperoxidase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MPO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MPO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MPO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MPO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.