MPO/Myeloperoxidase Double Nickaseプラスミド (h): sc-400822-NIC

MPOはミエロペルオキシダーゼ（myeloperoxidase）をコードする遺伝子であり、ヘムを含むペルオキシダーゼです。MPOは好中球のアズール顆粒に貯蔵され、脱顆粒および好中球細胞外トラップ（NET）形成の際に放出されます。MPOは過酸化水素と塩化物イオンから次亜塩素酸および関連する反応性酸化物を生成する反応を触媒し、NADPHオキシダーゼ依存的な呼吸バーストを、抗菌エフェクターとしての化学反応およびレドックスシグナル伝達に結び付けます。脂質・タンパク質・核酸の酸化を介して、MPO活性は炎症性シグナル伝達カスケード、内皮機能障害、免疫細胞の遊走／動員に影響を及ぼします。MPOの発現量や活性の変化は、自然免疫の制御異常や酸化ストレス表現型と関連し、炎症性疾患や血管疾患の病態生物学、ならびに腫瘍微小環境に関する研究においても重要性が示されています。

MPO/Myeloperoxidase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MPO 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MPO内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MPOの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MPOが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。