MOF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401891-ACT

KAT8は、ヒストンH4のリシン16（H4K16）のアセチル化（H4K16ac）を触媒するMYSTファミリーのヒストンアセチルトランスフェラーゼであるMOF（MYST1）をコードしている。H4K16acは、オープンクロマチンおよび転写能と関連する重要なクロマチンマークである。MOFは多タンパク質複合体の一員として機能し、プロモーターおよびエンハンサー活性を制御するとともに、転写伸長の協調や、DNA複製・修復時のクロマチン構造の調節に関与する。これらのエピジェネティックな役割を通じて、MOFはゲノム安定性、細胞周期の進行、ストレス応答に影響を及ぼし、KAT8/MOF活性やH4K16acパターンの変化は、がん遺伝子性の転写プログラムやDNA損傷シグナル伝達の破綻といった文脈でしばしば研究されている。さらに、クロマチン制御における中心的な位置づけから、KAT8は、アセチル化依存的なクロマチンリモデリングと、増殖・分化を制御するシグナル伝達経路とのクロストークを解析するための有用なノードでもある。

MOF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KAT8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MOF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KAT8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKAT8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MOFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKAT8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMOF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKAT8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMOF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。