MOB1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416280-ACT

MOB1B（MOB kinase activator 1B）は、Hippoシグナル伝達経路においてLATS1/2キナーゼの保存性の高い共活性化因子をコードし、YAP/TAZの活性、転写プログラム、ならびに細胞接触依存的な増殖制御を調節するリン酸化カスケードを支えます。Hippo経路の調節を介して、MOB1Bは細胞周期の進行、アポトーシス、組織恒常性の維持に寄与します。MOBファミリーの制御因子を含むHippo構成要素の撹乱は、増殖や遊走の表現型変化と関連し、がん化シグナルや上皮の完全性（インテグリティ）の文脈でしばしば研究されています。そのためMOB1Bは、細胞運命決定に影響するMAPK、PI3K-AKT、ならびに細胞骨格リモデリングネットワークとの経路クロストークを検討するうえでも重要です。

MOB1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MOB1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MOB1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MOB1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMOB1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MOB1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMOB1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMOB1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMOB1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMOB1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。