Mms2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404777-ACT

UBE2V2はMms2をコードしており、Mms2は触媒活性を欠くE2ユビキチン結合酵素のバリアントであるが、UBE2N/UBC13と機能的なヘテロ二量体を形成して、K63結合型ポリユビキチン鎖の形成を促進する。この非分解型のユビキチンシグナルは、PCNAのユビキチン化によって媒介される複製後修復やエラーのない損傷乗り越え（lesion bypass）を含む、DNA損傷耐性と修復を支える。Mms2依存的なユビキチン鎖形成は、ゲノム安定性や細胞周期チェックポイント制御と交差する、ストレス応答性シグナル伝達ネットワークにも寄与する。UBE2V2が関与するユビキチン介在性DNA修復経路の破綻は、変異負荷の変化や遺伝毒性ストレスに対する細胞感受性の変動と関連づけられており、がん生物学やDNA修復異常症の機序研究において重要である。

Mms2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBE2V2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mms2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBE2V2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBE2V2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mms2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBE2V2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMms2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBE2V2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMms2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。