MMP9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400083-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MMP9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MMP9ダブルニカースプラスミド（h）およびMMP9ダブルニカースプラスミド（h2）は、MMP9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MMP9 抗体 (E-11): sc-393859
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MMP9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400083-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMP9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400083-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMP9（マトリックスメタロペプチダーゼ9）は、IV型コラーゲンやゼラチンなどの細胞外マトリックス（ECM）成分を分解する、分泌型の亜鉛依存性エンドペプチダーゼをコードしており、組織リモデリングおよび基底膜のターンオーバーを協調的に制御します。MMP9活性は、ザイモーゲン（前駆体）型からの活性化と、TIMPによる阻害によって調節され、細胞移動、接着ダイナミクス、炎症シグナル伝達を調節するプロテアーゼネットワークと結びついています。血管新生、白血球の血管外遊走、創傷修復などの過程に関与し、サイトカインや増殖因子、MAPK/NF-κBシグナルの下流にあるECMリモデリングプログラムの文脈で、しばしば研究されています。MMP9の発現や活性の異常は、がんの浸潤・転移、心血管リモデリング、慢性炎症性疾患、ならびに神経炎症と関連することが示されています。
MMP9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MMP9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MMP9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MMP9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MMP9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。