MMP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400126-ACT

ヒトMMP2は、マトリックスメタロプロテアーゼ-2（ゼラチナーゼA）をコードしており、IV型コラーゲンやその他の細胞外マトリックス成分を分解する、分泌型の亜鉛依存性エンドペプチダーゼです。これにより基底膜のリモデリングが可能になります。MMP2活性は、タンパク質分解による活性化とTIMPによる阻害によって制御され、MT1-MMP（MMP14）やインテグリン介在性の接着シグナル伝達を含む、細胞周囲のプロテアーゼネットワークと密接に関連しています。細胞外マトリックスのターンオーバーを介して、MMP2は細胞移動、血管新生に伴うリモデリング、創傷修復、組織形態形成に影響を与えます。MMP2の発現や活性化の破綻は、腫瘍の浸潤・転移、線維性リモデリング、血管病変、炎症性の組織障害といった文脈でしばしば研究されています。

MMP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MMP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MMP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MMP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMMP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MMP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMMP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMMP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMMP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMMP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。