MLL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402052-ACT

KMT2C は、ヒトのヒストンH3リジンN-メチルトランスフェラーゼである MLL3 をコードしている。MLL3 は COMPASS ファミリーに属するクロマチン制御因子で、主にエンハンサー領域における H3K4 のモノメチル化を触媒し、細胞種特異的な転写プログラムの形成に寄与する。MLL3 は転写因子や共活性化因子複合体と協働することで、エンハンサーの活性化を系譜決定、分化、ならびに刺激応答性遺伝子発現と連動させている。ゲノム全体の制御エレメントに対するエピジェネティック制御を担うことを通じて、KMT2C はクロマチンリモデリング、DNA損傷応答、転写の忠実性に関連する経路にも影響を及ぼす。KMT2C/MLL3 に影響する遺伝学的・エピゲノム学的変化は、複数のヒト疾患状況で観察されるエンハンサー・ランドスケープの破綻と関連づけられており、遺伝子制御の機構解明研究における重要な結節点となっている。

MLL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KMT2Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KMT2C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKMT2C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKMT2C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKMT2C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。