Plasmide CRISPR d'Activation (h) MLL3: sc-402052-ACT

KMT2C code la méthyltransférase humaine des histones de type lysine N, MLL3, un régulateur de la chromatine de la famille COMPASS qui catalyse principalement la monométhylation de H3K4 au niveau des enhancers, afin de façonner des programmes transcriptionnels spécifiques à chaque type cellulaire. MLL3 coordonne l’activation des enhancers avec l’engagement de lignée, la différenciation et l’expression génique en réponse à des stimuli, en collaborant avec des facteurs de transcription et des complexes coactivateurs. Par son rôle dans le contrôle épigénétique d’éléments régulateurs à l’échelle du génome, KMT2C influence des voies liées au remodelage de la chromatine, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la fidélité transcriptionnelle. Des altérations génétiques et épigénomiques affectant KMT2C/MLL3 ont été associées à des paysages d’enhancers dérégulés observés dans de multiples contextes pathologiques humains, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la régulation génique.

MLL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KMT2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MLL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KMT2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KMT2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MLL3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KMT2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MLL3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MLL3 dans les cellules tumorales présentant une expression de KMT2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.