Plasmide Double Nickase (h) MLL2: sc-401659-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MLL2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MLL2 Double Nickase (h) et le plasmide MLL2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KMT2D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MLL2 Antibody (2E1): sc-293217
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MLL2 | sc-401659-NIC | 20 µg | $410.00 |
KMT2D (MLL2) code une histone‑lysine méthyltransférase contenant un domaine SET, qui catalyse principalement la mono‑ et la di‑méthylation de H3K4 au niveau des enhancers afin de soutenir l’initiation de la transcription et des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires. En tant que régulateur central de l’accessibilité de la chromatine, MLL2 s’intègre à des complexes de type COMPASS pour coordonner l’amorçage des enhancers, l’engagement de lignée et la transcription dépendante des signaux au sein des voies du développement et de l’immunité. La perturbation de KMT2D dérègle le contrôle épigénétique de la différenciation ainsi que des réseaux transcriptionnels sensibles aux dommages de l’ADN, contribuant à une identité cellulaire altérée et à une régulation génomique modifiée. Des études génétiques et épigénomiques ont associé la dysrégulation de KMT2D à des syndromes du développement et à divers phénotypes de remodelage de la chromatine liés au cancer, ce qui en fait une cible majeure en génomique fonctionnelle.
MLL2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KMT2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KMT2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KMT2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KMT2D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.