MLL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401659-ACT

KMT2D（MLL2）は、SETドメインを有するヒストンリシンメチルトランスフェラーゼをコードしており、エンハンサー領域におけるH3K4のモノメチル化およびジメチル化を触媒します。これによりクロマチンのアクセシビリティを形成し、系譜特異的な転写プログラムを制御します。MLL2はCOMPASS様複合体との相互作用を介して、エンハンサーの活性化、RNAポリメラーゼIIのリクルート、ならびに発生や細胞アイデンティティに重要な長距離の遺伝子制御を協調的に担います。KMT2Dに関連するエピジェネティック制御の破綻は、分化状態の変化、DNA損傷応答、そして多様ながんや発生疾患の文脈で観察される広範な転写異常と関連しています。エンハンサー・ランドスケープの制御因子として、KMT2Dは細胞運命決定、免疫シグナル、クロマチン依存的な増殖制御を司る経路において広く研究されています。

MLL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KMT2Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KMT2D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKMT2D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKMT2D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKMT2D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。