MLK4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405976-ACT

MAP3K21 codifica a quinase humana de linhagem mista 4 (MLK4), uma quinase de serina/treonina da família MAP3K que conecta sinais upstream de estresse e de fatores de crescimento à sinalização por MAPK. A MLK4 tem sido implicada na regulação das cascatas de quinases JNK e p38 e de programas celulares mais amplos, incluindo proliferação, diferenciação e apoptose, por meio de retransmissões de sinalização dirigidas por fosforilação. Alterações na arquitetura da via MAPK envolvendo MAP3K21/MLK4 têm sido associadas à desregulação da sinalização celular observada em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para mapeamento de vias e genômica funcional. A modulação experimental de MLK4 é, portanto, relevante para dissecar a dinâmica de redes de quinases, as respostas transcricionais ao estresse e a plasticidade de sinalização dependente do contexto em células humanas.

MLK4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLK4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLK4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLK4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLK4 em células tumorais com expressão de MAP3K21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.