MLK3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401781-ACT

MAP3K11 codifica a quinase humana de linhagem mista 3 (MLK3), uma MAP3K que integra diversos sinais upstream de estresse e citocinas à sinalização downstream de MAPKs, incluindo as cascatas de JNK e p38. Por meio da fosforilação de MAP2Ks como MKK4/7 e MKK3/6, a MLK3 ajuda a regular programas transcricionais que controlam inflamação, apoptose, remodelamento do citoesqueleto e migração celular. A atividade da MLK3 está ligada a redes de sinalização downstream de pequenas GTPases e de vias de receptores que moldam as respostas celulares ao estresse e as respostas da imunidade inata. A desregulação da sinalização MAP3K11/MLK3 tem sido implicada em contextos patológicos envolvendo ativação aberrante de MAPKs, incluindo adaptações de sinalização oncogênica e processos neuroinflamatórios ou neurodegenerativos.

MLK3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLK3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLK3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLK3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLK3 em células tumorais com expressão de MAP3K11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.