Partículas Lentivirales de Activación (m) MLH3: sc-432245-LAC

Mlh3 codifica MLH3, un homólogo de MutL que se asocia con MLH1 para apoyar la reparación de desajustes del ADN (mismatch repair) y la recombinación meiótica, contribuyendo a mantener la estabilidad del genoma. MLH3 participa en el procesamiento, asociado a la reparación, de intermediarios de recombinación y se ha implicado en la formación de entrecruzamientos (crossovers) durante la meiosis, influyendo en la segregación cromosómica y en fenotipos relacionados con la fertilidad. A través de sus funciones en la vigilancia de errores de replicación y el control de la recombinación, MLH3 se integra con vías que regulan las respuestas al daño del ADN y la progresión del ciclo celular. Por lo tanto, la actividad o regulación alteradas de MLH3 son relevantes para estudios de mutagénesis, inestabilidad cromosómica y mecanismos de enfermedad asociados a la reparación de desajustes en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral MLH3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Mlh3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MLH3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Mlh3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MLH3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Mlh3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.