MKP-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401479-NIC

A fosfatase de proteína de dupla especificidade 4 (DUSP4), também conhecida como fosfatase de MAP quinase-2 (MKP-2), é uma fosfatase nuclear que desfosforila e inativa MAPKs, com forte atividade sobre ERK1/2 e regulação dependente do contexto da sinalização de JNK e p38. Ao modular a dinâmica de fosforilação das MAPKs, a MKP-2 contribui para o controle de programas de genes de resposta imediata, progressão do ciclo celular, diferenciação e transcrição responsiva ao estresse. A DUSP4 participa da regulação por feedback a jusante de receptores tirosina-quinase e de estímulos inflamatórios, moldando a amplitude e a duração da saída da via de MAPK. Alterações na expressão ou na atividade de DUSP4 têm sido associadas à desregulação da sinalização de MAPK observada em múltiplos contextos de doença, o que sustenta seu uso como um nó mecanístico para mapeamento de vias e fenótipos em células humanas.

MKP-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DUSP4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DUSP4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DUSP4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DUSP4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.