MKP-1/DUSP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400243-ACT

DUSP1 codifica a fosfatase 1 de MAP quinase ativada por mitógenos (MKP-1), uma fosfatase de dupla especificidade que desfosforila e inativa MAPKs como ERK, JNK e p38 para ajustar a amplitude e a duração do sinal. Como um regulador de resposta imediata e sensível ao estresse, a MKP-1 integra sinais de citocinas, fatores de crescimento e estresse oxidativo para influenciar proliferação, apoptose, diferenciação e sinalização imune inata. Ao modular programas transcricionais dependentes de MAPK, incluindo o crosstalk entre AP-1 e NF-κB, a DUSP1 contribui para o controle por feedback de mediadores inflamatórios e para a adaptação celular ao estresse. A expressão desregulada de DUSP1 tem sido relatada em contextos de inflamação crônica, disfunção metabólica e reprogramação da sinalização associada ao câncer, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em estudos centrados em vias.

MKP-1/DUSP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DUSP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MKP-1/DUSP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DUSP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DUSP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MKP-1/DUSP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DUSP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MKP-1/DUSP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MKP-1/DUSP1 em células tumorais com expressão de DUSP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.