MITF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400401-ACT

小眼球症関連転写因子（MITF）は、メラノサイトの発生、色素形成、生存、分化を制御するプログラムを調節する、系譜決定型の bHLH-LZ 転写因子である。ヒト細胞において MITF は、MAPK/ERK や cAMP/PKA などの経路からのシグナル入力を統合し、メラノソーム生合成、酸化ストレス応答、リソソーム機能、細胞代謝に関与する遺伝子群の転写を協調的に制御する。MITF 活性の破綻は、メラノサイト系細胞状態の変化、色素異常、ならびにメラノーマの生物学と関連づけられており、MITF 依存的な転写ネットワークの変化が、増殖、浸潤、ストレスへの適応に影響し得る。転写制御の中心的ノードとして、MITF は細胞アイデンティティ、転写可塑性、シグナル依存的な遺伝子制御を研究するための分子学的な手がかりとして広く用いられている。

MITF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MITFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MITF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MITF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMITF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MITFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMITF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMITF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMITF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMITF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。