MIST1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402094-ACT

BHLHA15は、膵臓の腺房細胞、胃の主細胞、唾液腺系統などの“専門的な外分泌細胞”において、成熟化と分泌装置の形成を駆動する塩基性ヘリックス–ループ–ヘリックス（bHLH）型転写因子MIST1をコードする。MIST1は、調節性エキソサイトーシス、頂端—基底極性、小胞体（ER）および分泌顆粒ネットワークの拡張を支える転写プログラムを統合し、ER恒常性や分化を制御する経路とも交差する。MIST1活性の変化は、外分泌細胞の脱分化、腺房細胞のストレス応答、炎症性リモデリングに伴う系譜可塑性と関連づけられてきた。これらの特徴によりBHLHA15は、膵炎に伴う変化や膵腫瘍形成モデルに関連する、上皮分化状態および分泌組織機能不全の研究に有用な結節点となる。

MIST1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BHLHA15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MIST1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BHLHA15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBHLHA15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MIST1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBHLHA15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMIST1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBHLHA15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMIST1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。