Particules Lentivirales d'Activation (h) MISP: sc-409029-LAC

Le gène humain MISP (mitotic spindle positioning) code une protéine associée à l’actine et aux microtubules, qui se localise aux pôles du fuseau et au cortex cellulaire afin d’aider à orienter le fuseau mitotique et de soutenir une ségrégation fidèle des chromosomes. Par ses interactions avec des régulateurs du cytosquelette et des composants centrosomaux, MISP contribue à la progression de la mitose, à la cytocinèse et au maintien de l’architecture épithéliale. La dérégulation du positionnement du fuseau et de la symétrie de division relie les voies associées à MISP à l’instabilité génomique et à l’altération de la polarité cellulaire, des processus fréquemment étudiés en biologie des tumeurs et dans les contextes de stress prolifératif. En tant que nœud reliant la dynamique de l’actine corticale à l’organisation des microtubules, MISP est pertinent pour les recherches sur le contrôle du cycle cellulaire, l’aneuploïdie et l’organisation tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales MISP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MISP dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MISP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MISP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MISP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MISP ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.