MIP-3α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422839

Descripción general

Ccl20 codifica la quimiocina proteína inflamatoria de macrófagos 3 alfa (MIP-3α), un ligando secretado de CCR6 que dirige la quimiotaxis de células dendríticas inmaduras, linfocitos T de memoria y linfocitos B hacia sitios de activación epitelial. Inducida por NF-κB y por citocinas proinflamatorias, CCL20 participa en el tráfico de leucocitos, la vigilancia inmunitaria mucosa y la organización de microambientes inflamatorios. La desregulación de la señalización CCL20–CCR6 se ha asociado con procesos inflamatorios crónicos y con la patobiología autoinmunitaria, y se estudia con frecuencia en el contexto de la disfunción de la barrera epitelial y del reclutamiento de células inmunitarias asociado a tumores. En ratones, Ccl20 constituye un nodo accesible para diseccionar la migración celular impulsada por quimiocinas y las redes de citocinas en investigación de inmunología e inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MIP-3α (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl20 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl20 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl20 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MIP-3α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl20 para la investigación de la señalización de MIP-3α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl20 críticos para la función de MIP-3α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl20 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MIP-3α CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MIP-3α CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl20. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MIP-3α (m) y el plásmido HDR MIP-3α (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl20 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl20 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.