MIF Double Nickaseプラスミド (h): sc-400574-NIC

マクロファージ遊走阻止因子（MIF）は、多機能性（プレオトロピック）を有するサイトカインであり、酵素活性も持つタンパク質で、マクロファージの活性化、白血球の遊走、炎症性メディエーターの産生を調節することで、自然免疫および獲得免疫応答を制御します。MIFはCD74や、CXCR2/CXCR4/CXCR7などのケモカイン受容体を介した受容体依存性シグナル伝達と連携し、下流のMAPKおよびNF-κB経路を活性化して、サイトカイン放出、細胞生存、ストレス応答を形成します。さらにMIFはレドックス恒常性にも関与し、細胞周期制御やアポトーシスにも影響を与え得るため、炎症シグナルをより広範な細胞プログラムに結び付けます。MIFシグナルの破綻は、慢性炎症性疾患、自己免疫的表現型、腫瘍関連炎症と関連することが示されており、免疫学およびがん生物学における機序解析の頻繁な標的となっています。

MIF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MIF 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MIF内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MIFの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MIFが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。