MIF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400574-ACT

マクロファージ遊走阻止因子（MIF）は、タウトメラーゼ活性をもつ多機能性（プレオトロピック）なヒトサイトカインであり、自然免疫および獲得免疫応答、細胞生存、ストレスシグナル伝達を制御する。MIFは、CD74（CXCR2/CXCR4などの共受容体を伴う）を含む受容体を介して作用し、下流のMAPK/ERK、PI3K/AKT、NF-κB経路を活性化することで、炎症関連遺伝子の発現や白血球のリクルートを調節する。さらにMIFは、グルココルチコイドシグナルやレドックス恒常性とも相互作用し、マクロファージの分極、血管新生プログラム、腫瘍—免疫微小環境のダイナミクスに影響を与える。MIF発現の破綻は、慢性炎症性疾患、線維化、がん関連プロセスと関連づけられており、免疫制御や疾患関連シグナル伝達ネットワークの機構解析における有用な研究ターゲットとなっている。

MIF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MIFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MIF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MIF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMIF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MIFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMIF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMIF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMIF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMIF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。