MICA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418864-ACT

MICA（MHCクラスIポリペプチド関連配列A）は、ストレスによって誘導される細胞表面糖タンパク質をコードしており、NK細胞および一部のCD8+ T細胞に発現する活性化受容体NKG2Dのリガンドとして機能します。MICAがNKG2Dに結合することで、MICAは細胞ストレス、感染、形質転換を感知する免疫監視経路に寄与し、免疫シナプスにおける細胞傷害活性化やサイトカインシグナル伝達に影響を与えます。MICAの発現はDNA損傷応答、熱ショック経路、炎症性シグナルによって制御され、またそのシェディング（細胞表面からの切断・遊離）や表面提示の変化は、受容体との結合を調節し得ます。MICA–NKG2Dシグナル伝達の破綻は、腫瘍の免疫回避、慢性炎症状態、自己免疫疾患に関連した免疫活性化に関与すると示唆されています。

MICA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MICAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MICA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MICA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMICA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MICAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMICA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMICA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMICA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMICA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。