MIB1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404769-NIC

MIB1は、mindbomb E3ユビキチンタンパク質リガーゼ1をコードする遺伝子であり、DLL1やJAG1などのNotchリガンドをユビキチン化してリガンドのエンドサイトーシスと有効なNotch受容体活性化を促進する、RING型E3ユビキチンリガーゼです。Notchシグナルの強度とタイミングを制御することを通じて、MIB1は細胞運命の決定、分化、組織パターニングに影響を及ぼし、増殖や系譜コミットメントを制御する転写プログラムにも下流で作用します。さらにMIB1は、細胞表面における受容体—リガンドの動態を形作るユビキチン—プロテアソーム恒常性やエンドサイトーシス輸送経路とも交差します。MIB1の遺伝学的・機能的な攪乱は、発生シグナルの変調や疾患に関連する表現型と関連づけられており、Notch経路の異常が腫瘍形成や心血管生物学に寄与する状況も含まれます。

MIB1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MIB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MIB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MIB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MIB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。