MIA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404978

概要

ヒトMIA（melanoma inhibitory activity）遺伝子は、分泌型で細胞外マトリックスと相互作用するタンパク質をコードしており、細胞接着、遊走、組織リモデリングの制御に関与するとされています。MIAはインテグリン依存性およびマトリックス依存性のシグナル伝達を調節し、浸潤性表現型や細胞ストレス応答を形作る細胞骨格ダイナミクスにも影響を与え得ます。MIA発現の変化はメラノーマ（悪性黒色腫）や他の悪性腫瘍で報告されており、腫瘍—微小環境相互作用や転移挙動を文脈依存的に仲介する因子として、しばしば研究されています。可溶性因子としてのMIAは、細胞モデルにおける傍分泌シグナル伝達や細胞外経路への依存性を検討する目的でも用いられます。

MIA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMIA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MIA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MIAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MIAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MIAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MIA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MIAの機能に不可欠なMIAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MIAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MIA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMIA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MIA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MIA HDRプラスミド（h）および MIA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMIAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMIA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。