MIA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404978

Panoramica

La MIA (melanoma inhibitory activity) umana codifica una proteina secreta che interagisce con la matrice extracellulare ed è implicata nella regolazione dell’adesione cellulare, della migrazione e del rimodellamento tissutale. MIA può modulare la segnalazione dipendente da integrine e matrice e influenzare la dinamica del citoscheletro, che determina fenotipi invasivi e risposte allo stress cellulare. Un’alterata espressione di MIA è stata riportata nel melanoma e in altre neoplasie, dove viene spesso studiata come mediatore dipendente dal contesto delle interazioni tra tumore e microambiente e del comportamento metastatico. In quanto fattore solubile, MIA è anche utilizzata per studiare la segnalazione paracrina e le dipendenze delle vie extracellulari in modelli basati su colture cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MIA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MIA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MIA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MIA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MIA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MIA per lo studio della segnalazione di MIA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MIA critici per la funzione di MIA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MIA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MIA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MIA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MIA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MIA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MIA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MIA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MIA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.