MGMT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421647

Panoramica

Mouse Mgmt codifica la O-6-metilguanina-DNA metiltransferasi (MGMT), un enzima di riparazione diretta del DNA che rimuove addotti alchilici dalla posizione O6 della guanina trasferendo la lesione a una cisteina del sito attivo in una reazione “suicida” monouso. Questa attività contrasta la mutagenesi e lo stress replicativo derivanti da danni alchilanti endogeni e ambientali e si integra con i programmi di mantenimento del genoma che influenzano l’elaborazione della riparazione dei mismatch e la segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare. Alterazioni della funzione o dell’espressione di MGMT sono ampiamente studiate nei contesti dell’instabilità genomica indotta da alchilazione e della biologia tumorale, dove la capacità di riparazione del DNA può modellare gli spettri mutazionali e le risposte cellulari allo stress. Nel topo, Mgmt offre un sistema gestibile per indagare le vie di risposta al danno al DNA, la biologia della riparazione specifica di tessuto e i meccanismi che collegano le lesioni da alchilazione a modelli di cancerogenesi e neurotossicità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MGMT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mgmt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mgmt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mgmt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MGMT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mgmt per lo studio della segnalazione di MGMT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mgmt critici per la funzione di MGMT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mgmt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MGMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MGMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mgmt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MGMT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MGMT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mgmt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mgmt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.