MFSD2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-429366-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MFSD2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MFSD2ダブルニカースプラスミド（m）およびMFSD2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Mfsd2aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MFSD2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-429366-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mfsd2aは、主要促進輸送体（Major Facilitator Superfamily：MFS）に属する多回膜貫通型トランスポーターであるMFSD2をコードしており、内皮バリアに高発現して、特殊化した血管界面を介した脂質および栄養素の輸送に寄与します。マウスでは、MFSD2Aは脳微小血管内皮におけるトランスサイトーシス（transcytosis）の制御因子として最もよく知られており、血液脳関門（BBB）の完全性を支えるとともに、中枢神経系（CNS）の恒常性に影響を及ぼします。膜輸送と小胞輸送（ベシキュラートラフィッキング）の制御における役割を通じて、MFSD2Aは脂質代謝経路や、神経発達および神経炎症モデルに関連する細胞バリア機能に影響します。MFSD2A活性の変化は、バリア機能障害の表現型や神経疾患のメカニズムと関連づけられており、内皮輸送生物学やCNSに関連する代謝調節を研究するうえで有用な標的となっています。
MFSD2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Mfsd2a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Mfsd2a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Mfsd2aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Mfsd2aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。