Mfn1/Mitofusin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400637-NIC

MFN1 codifica la mitofusina 1 (Mfn1), una GTPasi di tipo dinamina incorporata nella membrana mitocondriale esterna che media la fusione dei mitocondri e contribuisce al mantenimento dell’architettura della rete mitocondriale. Attraverso omo- ed etero-oligomerizzazione con MFN2 e l’accoppiamento con la fusione della membrana interna dipendente da OPA1, Mfn1 influenza la dinamica mitocondriale, l’organizzazione delle creste e la resa bioenergetica. L’attività di MFN1 si intreccia con la mitofagia, la segnalazione apoptotica e la regolazione dei contatti tra reticolo endoplasmatico e mitocondri, plasmando così le risposte cellulari allo stress metabolico e al controllo di qualità. In studi meccanicistici, uno squilibrio nella bilancia fusione–fissione mitocondriale che coinvolge MFN1 è stato implicato nella neurodegenerazione, nella disfunzione cardiometabolica e nel rimodellamento metabolico associato al cancro.

Mfn1/Mitofusin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MFN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MFN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MFN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MFN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.