MFAP4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405012-ACT

MFAP4（microfibril-associated glycoprotein 4）は、弾性線維に関連するマイクロフィブリルに豊富に存在する細胞外マトリックス糖タンパク質をコードし、間葉系細胞や血管系細胞で発現します。MFAP4はマトリックスの組織化および細胞‐マトリックス間コミュニケーションに関与し、インテグリン連結経路を介した接着やシグナル伝達を支えることで、平滑筋細胞の挙動、線維芽細胞の活性、組織リモデリングに影響を与えます。MFAP4の発現や沈着の異常は、血管リモデリング、線維化に関連する細胞外マトリックスのターンオーバー、炎症性ストローマ応答といった文脈でしばしば研究対象となります。マトリックス関連因子として、MFAP4は細胞外マトリックス動態、メカノトランスダクション、微小環境依存的な表現型を検討するモデルにおいて、有用な指標であると同時に調節因子としても機能します。

MFAP4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MFAP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MFAP4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MFAP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMFAP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MFAP4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMFAP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMFAP4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMFAP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMFAP4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。