MESP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404176-ACT

MESP1（mesoderm posterior basic helix-loop-helix transcription factor 1）は、ヒトの発生における初期の中胚葉・内胚葉（メセンエンドダーム）の指定と、心血管系系譜へのコミットメントを制御するマスター制御因子です。bHLH型転写因子として、MESP1は原腸形成に伴う細胞運命決定、上皮間葉転換（EMT）、前駆細胞の遊走を司る転写プログラムを統合し、中胚葉のパターニングおよび心臓形成の開始に関わる上流ネットワークとして機能します。MESP1活性が異常に制御されると分化の軌道が乱れ、発生異常や系譜可塑性の変化に関与することが示唆されており、先天性心疾患の生物学や幹細胞を用いた疾患モデリングとの関連が指摘されています。in vitroでは、MESP1を制御して調節することで、初期発生における遺伝子制御ネットワークの機構研究や、中胚葉由来細胞種への分化プロトコールの開発を支援できます。

MESP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MESP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MESP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MESP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMESP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MESP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMESP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMESP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMESP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMESP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。