MELK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403062-ACT

母性胚性ロイシンジッパーキナーゼ（MELK）はセリン／スレオニンキナーゼであり、細胞周期進行の制御、有糸分裂チェックポイントの制御、ならびに増殖に関連する転写プログラムの調節に関与するとされています。MELK活性は、幹細胞様表現型、細胞ストレス応答、そしてMAPKやFOXM1関連ネットワーク、その他のキナーゼ制御プロセスと交差する経路を介した、有糸分裂と生存シグナルの協調に関連づけられてきました。MELK発現の変化は複数の腫瘍コンテキストで報告されており、増殖能や系譜可塑性のバイオマーカーとしてもしばしば研究されています。これらの特徴により、MELKは疾患関連の細胞モデルにおける有糸分裂制御、代謝適応、ならびに経路の再配線を検討するうえで有用なノードとなります。

MELK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MELKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MELK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MELK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMELK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MELKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMELK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMELK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMELK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMELK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。