Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Mel-CAM Double Nickaseプラスミド (h): sc-401020-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Mel-CAM Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Mel-CAMダブルニカースプラスミド（h）およびMel-CAMダブルニカースプラスミド（h2）は、MCAMを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Mel-CAM 抗体 (P1H12): sc-18837
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Mel-CAM Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401020-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mel-CAM Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401020-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCAMは、内皮細胞および免疫細胞・間質細胞の一部に発現する、細胞表面の免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着分子Mel-CAM（CD146）をコードします。Mel-CAMは細胞―細胞間および細胞―マトリックス間の相互作用に関与し、細胞骨格の再編成、遊走、接着結合の組織化に影響を与え、その下流で血管生物学や炎症時の細胞トラフィッキングに作用します。MCAMは血管新生や上皮―間葉系様の表現型変化に関連する過程にも関与するとされ、細胞外環境からのシグナルを統合して運動性や浸潤関連プログラムを制御します。MCAMの発現異常は腫瘍進展および転移モデルで頻繁に研究されており、血管機能障害や免疫介在性の病態生物学とも関連します。
Mel-CAM ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MCAM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MCAM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MCAMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MCAMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。